Campioni rapidi dell'essudato della lesione del siero di Kit Real Time For Human della prova di PCR del virus di Monkeypox

Specificazione

PROCEDURE

1. Preparazioni del campione
L'estrazione del DNA dai campioni clinici è condotta secondo i requisiti e le procedure corrispondenti nel corredo dell'estrazione del DNA del virus. Estratto

Il DNA può direttamente essere usato per rilevazione. Se il campione non è individuato subito dopo dell'estrazione, dovrebbe essere immagazzinato a -70°C per il appoggio, evitante i cicli di gelo-disgelo ripetuti.

2. Preparazione del sistema di reazione
(1) preparazione del sistema: Elimini il reagente dal corredo e che permetta che si sciolga completamente alla temperatura ambiente. Inverta immediatamente la miscela e la centrifuga. Reazioni della prova di N (N = il numero dei campioni da provare + controllo positivo + controllo negativo + 1) sono preparati per i sistemi di reazione, rispettivamente, come segue.

(2) distribuzione di sistema di reazione: Mescoli bene l'amplificatore di cui sopra della reazione, centrifuga e dispensi 15μL delle aliquote nei tubi di PCR adatti a strumento fluorescente di PCR. (Centrifughi i tubi di PCR a 6,000rpm affinchè 30s ed il trasporto provino la zona del trattamento.)

3. Caricamento del campione (zona di trattamento del campione)
Aggiunga il campione acido nucleico 10μL, il controllo negativo ed il controllo positivo ai tubi di cui sopra di PCR rispettivamente. Ricopra strettamente i tubi e la centrifuga a 6,000rpm per 10s e poi il trasporto alla zona di amplificazione di PCR.
* precauzione: L'aggiunta dei campioni nel seguente ordine è
ha raccomandato: campione acido nucleico del control-> negativo - > controllo positivo.
 

4. Amplificazione di PCR (zona di amplificazione di PCR)
4,1 metta i tubi caped di PCR nella macchina in tempo reale di PCR per l'amplificazione.
4,2 regolazione di stato del ciclo di PCR di fluorescenza

Raccolga i segnali fluorescenti al ℃ di 3:60 di punto; 35s per ABI 7500, 20s per SLAN-96S/96P, mentre 13s per altri sistemi in tempo reale di PCR. Il volume totale: 25μL.

4,3 disposizione dopo rilevazione
Disponga i tubi di PCR in una borsa sigillata dopo la reazione e tratti i tubi utilizzati come sprechi medici.
 

5. Regolazioni per analisi di risultato
Presenti la linea di base ad una regione l'amplificazione esponenziale dove i segnali fluorescenti di tutti i campioni sono relativamente stabili (nessun fluttuazioni significative in tutti i campioni); metta il punto di partenza (numero di ciclo) a partire dalle fluttuazioni del segnale ad iniziare
fase di raccolta di fluorescenza; presenti il punto finale (numero di ciclo) 1~3 cicli il Ct del primo campione per entrare nell'amplificazione esponenziale. 4~15 cicli sono raccomandati.
Fissi la destra della soglia sopra il più alto punto della curva negativa di amplificazione di controllo (curva irregolare di rumore).
 

6. Criteri di controllo di qualità
Prima della valutazione dei risultati dell'esemplare, il controllo positivo ed il controllo negativo dovrebbero essere interpretati facendo uso della tavola dell'interpretazione qui sotto ed il controllo positivo e la curva negativa di controllo devono essere eseguiti correttamente, altrimenti il risultato del campione è invalido.

7. Interpretazione dei risultati dei test
I canali per il virus di Monkeypox, risultato di FAM di rilevazione dovrebbero essere interpretati come sotto.
) un positivo: Il ≤ 38 di Ct e la curva di amplificazione è in forma di s.
b) ha sospettato: 38 < Ct=""> 40 o ≤ nullo 35 di Ct e di Ct in canale di VIC per la seconda prova.
c) negazione: Ct > 40 o ≤ nullo 35 di Ct e di Ct in canale di VIC.
d) nuovo test: Ct > 40 o Ct nullo e Ct > 35 in canale di VIC.